Diglicosidasas y el género Acremonium

Abstract

La degradación de flavonoides utilizando diglicosidasas se describió en los géneros Aspergillus, Penicillium y Acremonium. Este último, es un género complejo y recientemente se transfirieron algunos de sus miembros al género Sarocladium. En este trabajo, se realizó una búsqueda de diglicosidasas en 32 cepas pertenecientes a los géneros Acremonium y Sarocladium. La degradación de los flavonoides hesperidina y diosmina no se detectó en ninguna de las cepas ensayadas, mientras que 21 cepas fueron capaces de hidrolizar rutina. Dado que la clarificación o hidrólisis del flavonoide no indica la estrategia de desglicosilación, por ensayos zimográficos se detectaron siete cepas productoras de actividad diglicosidasa. Se seleccionó a Sarocladium strictum DMic 093557 como adecuado productor de enzimas, porque produjo una banda con un peso molecular aparente bajo y la mayor tasa de clarificación en medio sólido (Kc 2.01). En cultivo sumergido (25 °C, pH 5.0) con rutina como fuente de carbono, la máxima producción de actividad desglicosilante se detectó luego de 9 días de crecimiento (8.6 ± 0.8 U/L). Por otro lado, los productos de reacción de la hidrólisis de rutina se identificaron como rutinosa y quercetina, confirmando la producción de la actividad diglicosidasa. Se pretende secuenciar el péptido responsable de dicha actividad para su posterior caracterización dado su potencial de aplicación y la ventaja de tener acceso al genoma completo de S. strictum, que nos permitirá avanzar en estudios futuros.

Flavonoids degradation using diglycosidases was reported in the genera Aspergillus, Penicillium and Acremonium. The latter is a complex genus, and recently some of it´s members were transferred to the genus Sarocladium. In this work, a search for diglycosidases in 32 strains belonging to the genera Acremonium and Sarocladium was performed. The degradation of diosmin and hesperidin was not detected in any of the tested strains, whereas 21 strains were able to hydrolyze rutin. Although clarification or hydrolysis of the flavonoid does not indicate deglycosylation strategy, throughout zymographic analysis, seven strains were found as producers of diglycosidase activity. Sarocladium strictum DMic 093557 was selected among the strains as a suitable enzymatic producer due to the lower apparent molecular weight of the protein as well as the highest rate of clarification on solid medium (Kc 2.01). Furthermore, the reaction products of the rutin hydrolysis were identified as quercetin and rutinose, confirming the production of diglycosidase activity. In submerged cultures (25 °C, pH 5.0) with rutin as sole carbon source, the higher production of diglycosidase was detected at the ninth day (8.6 ± 0.8 U/L). The potential application of the peptide responsible of this activity and the advantage of having access to the complete genome of S. strictum will drive future studies.