Actividad diglicosidasa de Cryptococcus Carnescens

Abstract

La actividad diglicosidasa de Cryptococcus carnescens fue descripta previamente en sustratos que contienen el disacárido primeverosa (6-O- β -D-xilopiranosil- β -D-glucopiranosido). En este trabajo se evaluó su capacidad para desglicosilar metabolitos con el disacárido rutinosa (6-O-α-L-ramnopiranosil- β -D-glucopiranosido). La levadura se cultivó en condiciones aeróbicas en medio sólido con los flavonoides, hesperidina, rutina y diosmina, como fuentes de carbono y solo se detectó la hidrólisis sobre los dos primeros. El perfil de actividad a diferentes valores pH y temperatura, mostró un máximo a pH 6 y una temperatura de 55ºC. El cultivo con hesperidina como fuente de carbono no exhibió actividad con los sustratos monoglicosilados (4-metilumbeliferil-glucósido y 4-metilumbeliferil-ramnósido). Sin embargo, el análisis zimográfico mostró una banda de actividad, con un Rf de 0.70, con el sustrato artificial 4-metilumbeliferil-rutinósido. Cuando C. carnescens fue cultivado en rutina como fuente de carbono también produjo una banda de actividad diglicosidasa con el mismo Rf de la anterior. Estos resultados sugieren que este microorganismo produce actividad diglicosidasa específica para rutinosa y que podría ser la misma hidrolasa para ambos flavonoides. Por otro lado, no se detectó actividad de transglicosilación sobre aceptores con oxhidrilos primarios.

Diglycosidase activity from Cryptococcus carnescens was previously described for an artificial substrate containing the disaccharide primeverose (6-O- β -D-xylopyranosyl- β -D-glucopyranoside). Herein, the deglycosylation of metabolites containing a rutinose moiety (6-O-α-L-rhamnopyranosyl- β -D-glucopyranose) was evaluated. Hydrolysis was detected with hesperidin and rutin but not with diosmin. Deglycosylation activity from broth cultures with hesperidin as carbon source showed a maximum at pH 6 and 55ºC. Although the activity against the monoglycosylated substrates (4-methylumbelliferyl-glucoside and 4-methylumbelliferyl-rhamnoside) was not detected, the zymographic analysis showed a positive band of activity with the substrate MU-rutinoside (4-methylumbelliferyl-rutinoside, Rf 0.70) indicating the presence of a diglycosidase. Transglycosylation activity with primary OH-acceptors was not detected. The supernatant from cultures with rutin as carbon source also showed a diglycosidase activity band with the same Rf. Therefore, the results indicated that C. carnescens produces at least one diglycosidase able to hydrolyze hesperidin and rutin. The equal Rf found in the zymographic assays with both flavonoids suggest the presence of a promiscuous enzyme.